Резюме

Изучали влияние препаратов гуминовых веществ (ГВ) на действие нефтепродуктов на Cladocera. ГВ ослабляли или даже полностью предотвращали негативный эффект углеводородов нефти на рачков. Препараты ГВ и поверхностно-активных веществ меняли размеры и число капель в эмульсиях углеводородов нефти и повышали гидрофильность поверхностей организмов.

Нефть и нефтепродукты относятся к наиболее опасным и распространенным загрязнителям окружающей среды. Показано, что гуминовые вещества (ГВ) ослабляют повреждающее действие некоторых химических соединений (Steinberg et al., 2000). ГВ способствуют рекультивации нефтезагрязненных субстратов (Технологии восстановления почв…, 2003; Салеем и др., 2004; Prosen, Troha, Zupančič-Kralj, 2002). Появились сообщения, что ГВ могут изменять токсичность углеводородов нефти (Стом, Дагуров, 2004). В этой связи задачей данного сообщения было изучение возможности ослабления токсических эффектов нефтепродуктов на биотесты.

Объекты и методы исследований

В качестве основного тест-объекта использовали лабораторную культуру Cladocera - Daphnia magna Straus (Жмур, 1997). Выживаемость Cladocera является наиболее широко применяемым биотестом (ПНД Ф Т, 2000). Но дафнии гибнут лишь при повышенных концентрациях углеводородов. Поэтому в наших опытах основным индикатором негативного действия токсикантов на дафний служило количество рачков перешедших на поверхность водных эмульсий нефтепродуктов через 24 часа (Balayan et al., 2000). Эта тест-реакция является значительно более чувствительным показателем наличия эмульсий нефтепродуктов, чем гибель дафний (Балаян, Стом, Саксонов, 2000). Методика наблюдения всплытия дафний в эмульсиях нефтепродуктов в поверхностный слой дана в (Стом и др., 2003). Содержание рачков, культивирование и эксперименты проводили в лабораторных условиях согласно общепринятым методикам (Fernández-Alba et al., 2002).

Объектами исследований служили и споры бактериальных культур Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki и Bacillus cereus 9. Споры бактериальных культур получали по (Вятчина, 2004).

Гидрофобность поверхности спор оценивали по количеству спор, перешедших из водной бактериальной суспензии в гексадекан (Rosenberg, Gutiik, Rosenberg, 1980). Для этого определяли оптическую плотность при l=400 мкм.

При проведении исследований источником ГВ служил препарат “Гумат-80” (ООО “АгроТех Гумат”, Россия). Его получают с помощью безэкстрационной переработки углей. Кроме того, использовали “Powhumus” (гумат калия из леонардита) производства “Humintech GmbH.” (ФРГ). Там, где дополнительно не указано в качестве ГВ брали препарат “Гумат-Экстра”.

Из нефтепродуктов использовали: дизельное топливо, топочный мазут М-40, неэтилированные автомобильные бензины с октановым числом 80, 92 и 95; алифатические углеводороды: гексан, гептан, октан, изооктан, нонан, декан, ундекан, додекан, гексадекан, октадекан, нонадекан; ароматические углеводороды: бензол, этилбензол, изопропилбензол, нафталин, антрацен; циклоалканы: гексаметилен, декагидронафталин. Все углеводороды были марки х.ч., ч.д.а. или их чистили непосредственно перед опытом. Эмульсии нефтепродуктов получали перемешиванием в течение 60 мин. на магнитной мешалке (Миронов и др., 1985). Для получения насыщенных растворов углеводородов, в стеклянные цилиндры, объемом на 2 литра диаметром 5 см, наливали почти доверху воды, и затем на их поверхность с помощью пипетки осторожно наслаивали слой нефтепродуктов толщиной 1 см. и выдерживали при 20⁰ С в течение 30 суток (Долгополова и др., 1991). Сосуды снабжали устройством, позволяющим отбирать пробы раствора из-под пленки углеводородов

Маточный раствор гумата готовили, растворяя навеску 0,5 г сухого препарата “Гумат-Экстра” в 1 литре воды. Затем его центрифугировали при 7 тыс. об./мин. в течение 5 минут. После фильтрации через бумажный фильтр (белая лента) отделяли нерастворившуюся часть.

Для выращивания дафний и контроля брали отстоянную воду. Для опытов отбирали молодь одного помета в возрасте 2-х суток. В каждый экспериментальный сосуд объемом 50 мл помещали по 10 рачков.

Аккумуляцию нефтепродуктов на дафниях наблюдали с помощью светового и люминесцентного (Люмам И-1) микроскопов. Для возбуждения флуоресценции (l=365 нм) применяли ртутную лампу ДРШ 250-3 и светофильтр УФС 6, для выделения света флуоресценции - ЖС 3. Для окрашивания нефтепродуктов и углеводородов нефти использовали “Судан-IV”.

Опыт и контроль имели не менее 6 повторностей при трех параллелях в каждой. Для статистической обработки полученных данных применяли общепринятые методы (Piegorsch, Bailer, 1997) с использованием пакета программ Statgraf 3.0 и Excel 97. Достоверность различия определяли с помощью критерия Стьюдента. Выводы сделаны при вероятности безошибочного прогноза Р³0,95.

Результаты исследований и их обсуждение.

Растворы “Гумат-экстра” и “Powhumus” приготовленные из исходной навески 0,5 г/л не оказывали видимого эффекта на дафний.

Эмульсии нефти и нефтепродуктов в концентрациях 0,5-2,5 мл/л инициировали всплытие рачков на поверхность эмульсий (табл. 1). Препараты гумата в испытанных концентрациях в большинстве случаев предотвращали или, по крайней мере, существенно снижали инициируемое эмульсиями нефти, нефтепродуктов и их индивидуальных углеводородов всплытие дафний (табл. 1, 2). Этот феномен наблюдали при добавлении гумата к эмульсиям нефти, самых различных нефтепродуктов, ароматических, алифатических и нафтеновых углеводородов (Dagurov, Stom, 2004).

Таблица 1 - Влияние эмульсий нефтепродуктов в присутствии и в отсутствие 0,5г/л “Гумат-Экстра” на выживаемость и всплытие на поверхность дафний при 24-х часовой экспозиции (% от общего числа рачков)

Концентрация, мл/л	Нефть		Нефть + гумат		Мазут		Мазут + гумат		Дизельное топливо		Дизельное топливо + гумат
	Количество рачков
	перешедших в поверхностный слой	живых	перешедших в поверхностный слой	живых	перешедших в поверхностный слой	живых	перешедших в поверхностный слой	живых	перешедших в поверхностный слой	живых	перешедших в поверхностный слой	живых
0,5	100	51,1 ±5,3	0	88,9 ±3,3 **	100	87,8 ±3,5	0	100 **	100	44,4 ±5,2	0	100 **
1	100	32,2 ±4,9	0	56,7 ±5,2 **	100	83,3 ±3,9	0	100 **	100	0	0	51,1 ±5,3 **
1,5	100	26,7 ±4,7	0	52,2 ±5,3 **	100	76,7 ±4,5	0	100 **	100	0	15,6 ±3,8 **	46,7 ±5,3 **
2	100	0	0	24,4 ±4,5 **	100	51,1 ±5,3	0	83,3 ±3,9 **	100	0	17,8 ±4,0 **	0
2,5	100	0	0	16,7 ±3,9 **	100	33,3 ±5,0	0	77,8 ±4,4 **	100	0	21,1 ±4,3 **	0

Примечания

1) в представленной таблице и последующих: “*”- Р ³ 0,95, “**”- Р ³ 0,99;

2) растворы гумата с исходной концентрацией 0,5 г/л не оказывали видимого влияния на дафний.

Особенно эффективным оказалось антидотное действие гумата на нефть и дизельное топливо. В отсутствие гумата 100% рачков оказывались на поверхности. В присутствии гумата 100% дафний плавали в толще эмульсии (табл.1).

Таблица 2 - Влияние эмульсий алифатических углеводородов в присутствии и в отсутствие 0,5г/л “Гумат-Экстра” на выживаемость и всплытие на поверхность дафний при 24-х часовой экспозиции (% от общего числа рачков)

Концентрация, мл/л

Декан

гумат

Ундекан

гумат

Гексадекан

гумат

Количество рачков

перешедших

в поверхностный слой

живых

перешедших

в поверхностный слой

живых

перешедших

в поверхностный слой

живых

перешедших

в поверхностный слой

живых

перешедших

в поверхностный слой

живых

перешедших

в поверхностный слой

живых

0,5

100

60,0 ±5,2

100

71,1 ±4,8

100

33,3 ±5,0

53,3 ±5,3**

100

50,0 ±6,1

74,4 ±4,6**

100

58,9 ±5,2

100

1,5

100

15,6 ±3,8**

11,1 ±3,3**

100

33,3 ±5,0

64,4 ±5,0**

100

50,0 ±5,3

100

Примечание - растворы гумата с исходной концентрацией 0,5г/л не оказывали видимого влияния на дафний.

Гумат в некоторых вариантах опытов ослаблял и токсическое действие эмульсий нефти и нефтепродуктов. Так, в эмульсиях дизельного топлива (концентрации 0,5 и 1 мл/л) присутствие 0,5 г/л гумата на 50% повышало выживаемость дафний. В эмульсии 2 мл/л дизельного топлива в отсутствие гуматов рачки погибали через 5 часов. В присутствии гумата дафнии погибали только через 24 часа. Концентрация 2,5 мл/л вызывала полное обездвиживание рачков через 4 часа. В присутствии же гумата Cladocera активно плавали в течение 5 часов. Несколько менее эффективно гумат снижал токсичность мазута. Но наименее выраженным было ослабление гуматом действия на дафний эмульсий нефти. Вместе с тем растворы препарата гумата в этой концентрации ослабляли или даже предотвращали переход дафний в поверхностный слой, вызываемый действием эмульсий практически всех нефтепродуктов (табл. 1). Ослабление или полное подавление всплытия дафний на поверхность и снижение токсичности прослеживалось также в опытах с эмульсиями индивидуальных алифатических углеводородов, входящих состав нефтепродуктов (табл.2).

“Гумат-80” ослаблял не только токсический эффект эмульсий нефтепродуктов, но и их растворов (табл. 3). Например, в разбавленных в два раза водой насыщенных растворах дизельного топлива число выживших дафний было на 33 % меньше, чем при соответствующем их разбавлении растворами 0,5 г/л гумата.

Таблица 3 - Влияние смесей равных объемов насыщенных растворов нефти, нефтепродуктов и 0,5 г/л “Гумат-Экстра” на выживаемость дафний (% от общего числа рачков)

Компоненты смесей (1 : 1)	Время инкубирования, час
Компоненты смесей (1 : 1)	1	3	6	24
Нефть	100	62,2 ±5,1	0	0
Нефть + гумат (0,5г/л)	100	80,0 ±4,2**	0	0
Мазут	100	38,9 ±5,1	10,0±3,2	0
Мазут + гумат (0,5г/л)	100	63,3 ±5,1**	23,3±4,5*	0
Дизельное топливо	100	100	81,1±4,1	37,8±5,1
Дизельное топливо + гумат (0,5г/л)	100	100	100**	80,0±4,2**
Бензин А-92	100	90,0±3,2	74,4±4,6	70,0±4,8
Бензин А-92 + гумат (0,5г/л)	100	100**	100**	100**

Кроме ГВ, инициируемое эмульгированными нефтепродуктами, всплытие дафний на поверхность, из огромного числа испытанных соединений ослабляли только поверхностно-активные вещества (Стом и др., 2003).

Добавление гумата и ПАВ “Tween-20” в эмульсии нефтепродуктов, концентрации которых вызывали 100% всплытие дафний на границу раздела фаз жидкость-воздух, инициировало обратный переход рачков из поверхностной пленки в толщу эмульсии (табл. 4).

Таблица 4 – Количество рачков (% от общего числа) в поверхностном слое эмульсии углеводородов 0,5 мл/л до и после добавления 0,5 г/л “Гумат-80” и 0,5 мл/л “Tween-20” (экспозиция 24 часа)

Соединение	Количество рачков в поверхностном слое эмульсии
Соединение	без гумата и ПАВ	с гуматом	с ПАВ	с гуматом и ПАВ
Гептан	100	35,6 ±5,0**	30,0 ±4,8**	7,8 ±2,8
Октан	100	34,4 ±5,0*	50,0 ±5,3**	20,0 ±4,2
Ундекан	100	23,3 ±4,5*	48,9 ±5,3**	11,1 ±3,3
Додекан	100	45,6 ±5,2**	63,3 ±5,1**	15,6 ±3,8

При этом одновременное добавление ГВ (“Гумат-Экстра”) и ПАВ (“Tween-20”) в эмульсии нефтепродуктов (гептан, октан, ундекан, додекан) с D. magna, всплывшими в поверхностную пленку под действием эмульгированных углеводородов нефти, вызывало более сильный эффект обратимости реакции всплытия дафний, чем при добавлении только гуматов или ПАВ. Например, из таблицы 4 видно, что эмульсии 0,5 мл/л октана инициировали при 24-х часовой экспозиции всплытие 100% рачков в поверхностный слой. После добавления к эмульсиям октана препарата “Гумат-80” количество всплывших рачков снизилось на 65%. При добавлении “Tween-20” упало на 50%, при совместном действии гумата и ПАВ на 80%. Подобное же влияние на эмульсии нефтепродуктов проявлялось и при постановке экспериментов с препаратами “Гумат-80” и “Triton X-100” (табл. 5).

Таблица 5 – Количество рачков (% от общего числа) в поверхностном слое эмульсии углеводородов 0,5 мл/л до и после добавления 0,5 г/л “Гумат-80” и 0,5 мл/л “Triton X-100” (экспозиция 24 часа)

Соединение	Количество рачков в поверхностном слое эмульсии
Соединение	без гуматов и ПАВ	с гуматом	с ПАВ	с гуматом и ПАВ
Октан	100	35,6 ±5,0**	66,7 ±5,0**	17,8 ±4,0
Декан	100	46,7 ±5,3**	68,9 ±4,9**	26,7 ±4,7
Ундекан	100	26,7 ±4,7*	67,8 ±4,9**	13,3 ±3,6
Додекан	100	45,6 ±5,2**	58,9 ±5,2**	23,3 ±4,5

Аналогичные данные были получены и при исследовании совместного влияния ГВ и ПАВ на эффекты эмульсий дизельного топлива на дафний. Например, эмульсии 0,5 мл/л дизельного топлива вызывали при 24-х часовой экспозиции переход 100% рачков на границу раздела фаз жидкость-воздух. После добавления к этим эмульсиям препарата “Гумат-Экстра” количество всплывших рачков снизилось на 55%, при добавлении “Tween-20” - на 46%, при совместном действии ГВ и ПАВ - на 73%.

Проведенные эксперименты позволили предположить, что в основе влияния ГВ и ПАВ на инициируемый действием нефтепродуктов переход Cladocera на поверхность водных сред лежат схожие механизмы.

Люминесцентное микроскопирование выявило следующее. Капли эмульсии нефтепродуктов давали характерное синее свечение. Подобная же синяя пленка обнаруживалась и вокруг тел дафний всплывших на поверхность. Накопление нефтепродуктов на поверхности дафний, всплывших на границу раздела жидкость-воздух, подтвердила и световая микроскопия. Рачки, переходившие в таких эмульсиях на поверхность, имели вокруг тела красный ободок. Точно такой же цвет приобретали и капли нефтепродуктов, окрашенные суданом. При этом важно отметить, что у рачков извлеченных из толщи этих же эмульсий такой ободок отсутствовал. Ранее была высказана гипотеза, связывающая невозможность ухода рачков из поверхностного слоя в толщу эмульсии нефтепродуктов с гидрофобизацией их покровных тканей углеводородами нефтяной пленки (Лозовой, 2003). Поэтому мы предположили, что ослабление ГВ токсических эффектов нефтепродуктов и, прежде всего перехода дафний на поверхность связана с поверхностно-активными свойствами ГВ. Именно благодаря им изменяются гидрофильно-гидрофобные характеристики поверхностных покровов тела дафний (Дагуров и др., 2004).

Для проверки этого предположения проведены следующие эксперименты. Дафний погружали на 5 секунд в гексадекан или другие нефтепродукты. Благодаря этой процедуре поверхность тела рачков покрывалась пленкой углеводорода. Пленку хорошо было видно при люминесцентном микроскопировании или после окрашивания нефтепродуктов суданом. После этого в первом случае дафний помещали в воду. Во втором варианте – рачков обработанных нефтепродуктами опускали в раствор гумата с концентрацией 0,1 г/л и затем перемещали в чистую воду. В третьем случае дафний последовательно погружали в углеводород, затем в растворы ПАВ (0,1 мл/л) и помещали в воду. Наблюдения показали, что все дафнии, обработанные углеводородами нефти и перенесенные в воду находились на границе раздела жидкость - воздух. Дафнии, последовательно помещенные в нефтепродукты, а затем в растворы гумата или ПАВ и перенесенные в чистую воду переходили в толщу инкубационного раствора и там активно плавали. Это свидетельствует в пользу связи затрудненности перехода рачков в толщу эмульсии с повышением гидрофобности поверхности их тела, вследствие адсорбции на покровных тканях нефтепродуктов. Переход же дафний в толщу инкубационных сред после их обработки гуматами или ПАВ в этом случае можно было предположительно объяснить увеличением гидрофильности поверхности рачков. При микроскопировании рачков после обработки ГВ и ПАВ ни в световом микроскопе, ни в люминесцентном пленка углеводородов на панцире ракообразных не обнаруживалась.

Высказанная гипотеза подтверждается результатами опытов по оценке гидрофильно-гидрофобных свойств поверхности бактериальных спор. Выдерживание спор Bacillus thuringiensis в эмульсиях нефтепродуктов приводило к повышению гидрофобности их поверхности (таблица 6).

Таблица 6 – Индекс гидрофобности спор штамма бактериальной культуры Bacillus thuringiensis после обработки гуматами, ПАВ и нефтепродуктами

Состав суспензии		Индекс гидрофобности, %
Исходная суспензия бактериальных спор	1	55,7 ±1,7
Суспензия после обработки “Гумат-Экстра” (0,1 г/л)	2	8,2 ±0,3**
Суспензия после обработки “Powhumus” (0,1 г/л)	3	23,9 ±1,8**
Суспензия после обработки ПАВ “Tween-20” (0,1мл/л)	4	22,8 ±1,3**
Суспензия после обработки мазутом (0,1 мл/л)	5	72,3 ±2,1
Суспензия после последовательной обработки мазутом (0,1 мл/л) и “Гумат-экстра” (0,1 г/л)	6	26,8 ±2,6**
Суспензия после последовательной обработки мазутом (0,1 мл/л) и “Tween-20” (0,1 мл/л)	7	32,4 ±2,5**

Примечание - достоверность различия процентов между 1:2; 1:3; 1:4; 5:6; 5:7.

Из таблицы 6 видно, что после инкубирования в растворах гумата индекс гидрофобности поверхности бактериальных спор B. thuringiensis был значительно ниже, чем у исходной бактериальной суспензии. Так, после обработки “Гумат-80” индекс гидрофобности снизился на 47%, а в случае “Powhumus” на 31%.

Гуматы не только уменьшали гидрофобность поверхности исходных бактериальных спор, но и спор обработанных различными нефтепродуктами. Например, после инкубирования в мазуте индекс гидрофобности составлял 72%. После обработки тех же бактериальных суспензий 0,5 г/л “Гумат-80” индекс снизился на 45%. Подобное действие на споры, находившихся в нефтепродуктах, оказывали и ПАВ (таблица 6). Аналогичный эффект гуматов и ПАВ обнаружен и при проведении экспериментов с бактериальными спорами B. cereus. Так до обработки мазутом индекс гидрофобности B. cereus составлял 25%, после – 48%. Если же споры B. cereus последовательно обрабатывали мазутом, а потом растворами гумата или ПАВ, то индекс гидрофобности снижался до 27% и 30% соответственно.

Таким образом, гуматы и ПАВ, действуя на бактериальные споры, изменяли гидрофильно-гидрофобный показатель их поверхности в сторону повышения гидрофильности. Обработка нефтепродуктами суспензий спор бактерий приводила к возрастанию гидрофобности их поверхности. Под влиянием ГВ и ПАВ индекс гидрофобности поверхности спор бактерий предварительно подвергнутых воздействию нефтепродуктов снижался.

Как видно из таблицы 7, добавление 0,1 г/л гумата и 0,1 мл/л ПАВ “Tween-20” к эмульсиям нефтепродуктов (3 мл/л) и углеводородов нефти приводило к уменьшению размера и количества капель в 1см³ объема по сравнению с эмульсиями нефтепродуктов и углеводородов нефти без добавления гумата и ПАВ.

Таблица 7 - Влияние 0,1 г/л “Гумат-80”, 0,1 мл/л ПАВ “Tween-20” и их смесей на количество и размер капель в эмульсиях нефтепродуктов (3 мл/л)

Нефте-продукт	Параметры эмульсии	Эмульсия	Эмульсия + гумат	Эмульсия + ПАВ	Эмульсия + гумат + ПАВ
Дизель-ное топливо	Количество капель в 1 см³эмульсии	(7,2 ±0,4)´10⁷	(4,3 ±0,3) ´10⁷**	(4,2 ±0,4) ´10⁷*	(2,5 ±0,3) ´10⁷
Дизель-ное топливо	Средний диаметр капли, мкм	22,7 ±3,5	7,2 ±0,6**	3,5 ±0,5*	2,1 ±0,2
Мазут	Количество капель в 1 см³эмульсии	(6,4 ±0,5) ´10⁷	(3,4 ±0,2) ´10⁷*	(3,1 ±0,1) ´10⁷*	(2,3 ±0,2) ´10⁷
Мазут	Средний диаметр капли, мкм	19,6 ±2,0	5,7 ±0,6*	5,9 ±0,4*	3,3 ±0,5
Гекса- декан	Количество капель в 1 см³эмульсии	(6,8 ±0,4) ´10⁷	(4,3 ±0,3) ´10⁷**	(3,6 ±0,3) ´10⁷*	(2,5 ±0,1) ´10⁷
Гекса- декан	Средний диаметр капли, мкм	16,8 ±1,8	6,3 ±0,5**	3,5 ±0,1*	2,6 ±0,3

Известно, что ПАВ снижают долю эмульгированной фазы гидрофобных веществ в гидрофильной дисперсионной среде. При этом происходит увеличение отношения площади поверхности капель к их объему (Абрамзон, Зайченко, Файнгольд, 1988). Кроме того, ПАВ солюбилизируют органические вещества малорастворимые в воде. Следовательно, уменьшение дисперсной фазы и диаметра капель нефтепродуктов под действием ПАВ, а также гуматов и усиление эффектов ГВ и детергентов на эмульсии при их совместном действии можно рассматривать, как свидетельство того, что ГВ способны выступать как аналоги детергентов, то есть ГВ снижают поверхностное натяжение на границе раздела фаз нефть-вода и солюбилизируют нефтепродукты.

Таким образом, общий характер влияния гуматов и детергентов на реакции дафний в присутствии эмульсий нефтепродуктов:

1.способность обеих групп веществ предотвращать всплытие рачков на границу раздела вода-воздух;

2. вызывать обратный переход дафний в толщу эмульсии;

3. сходное влияние этих веществ на дисперсное состояние эмульгированных нефтепродуктов, выражающееся в уменьшении размеров и числа капель в эмульсиях углеводородов нефти;

4. взаимоусиление их эффектов при совместном действии;

5. противоположное действие ГВ, ПАВ и нефтепродуктов на степень структурированности воды свидетельствуют о том, что в основе антидотного действия ГВ по отношению к углеводородам нефти лежит их способность выступать в роли аналогов ПАВ.

Авторы признательны И.В. Перминовой за предоставление препарата “Powhumus”.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант №05-04-97237).

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Steinberg C. E. W., Haitzer M., Bruggemann R., Perminova I. V., Yashchenko N. Yu., Petrosyan V.S. Towards a Quantitative Structure Activity Relationship (QSAR) of Dissolved Humic Substances as Detoxifying Agents in Freshwaters // Internat. Rev. Hydrobiol. – 2000. - 85. – P. 253-266.

2. Технологии восстановления почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами. Справочник. - М.: РЭФИА, НИА-Природа, 2003. – 258 с.

3. Биорекультивация нефтезагрязненных почв гуминовыми препаратами / Салем К. М., Перминова И. В., Гречищева Н. Ю., Мурыгина В. П., Мещеряков С. В. // ЭКиП: Экология и промышленность России. - 2003. - № 4. - С. 19-21

4. Prosen H., Troha A., Zupančič-Kralj L. Studies of Interaction between Some Organochlorine Insecticides and Humic Acid Using Solid-phase Microextraction and Gas Chromatography // Acta Chim. Slov. – 2002. – 49. – P. 561 - 573.

5. Стом Д.И., Дагуров А.В. Комбинированное действие нефтепродуктов и “Гумата” на дафний // Сибирский экологический журнал. – 2004. - № 1. - С.35-40.

6. Жмур Н.С. Государственный и производственный контроль токсичности вод методами биотестирования в России. - М.: Международный Дом Сотрудничества, 1997. - 117 с.

7. ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.5-2000 // Методика определения токсичности воды по смертности и изменению плодовитости дафний. - М., 2000. - 35 с.

8. Balayan A.E., Saxonov M.N., Stom D. I., Polovitkin V.P., Lozovoy D.V. Method of biotesting of oil pollution based on behavior of Daphnia magna //Program and Proceedings of the International Symposium on Ecotechnology in Environmental Protection and Fresh Water Lake Management. - Natural Science Auditorium, PaiChai University, 2000. - P. 254.

9. Патент № 2152612 РФ, С 1 7 G 01 N 33/18 Способ биотестирования нефтепродуктов / Балаян А.Э., Стом Д.И., Саксонов М.Н. - № 96114126/04; Заявл. 96114126; Опубл. 10.07.2000, Бюлл. № 19

10. Стом Д.И., Балаян А.Э., Саксонов М.Н., Лозовой Д.В. Токсикологическая оценка нефтезагрязненных вод с помощью ракообразных // Сибирский экологический журнал. – 2003. - № 5. – С. 565 – 567.

11. Fernández-Alba A.R., Hernando M.D., Piedra L., Chisti Y. Toxicity evaluation of single and mixed antifouling biocides measured with acute toxicity bioassays // Analytica Chimica Acta. – 2002. – 456. – P. 303 - 312.

12. Вятчина О.Ф. Штаммы Bacillus thuringiensis, выделенные при эпизоотии лиственничной мухи (Hylemyia laricicola) в Камчатской области // Сибирский экологический журнал. – 2004. - № 4. – С. 501 – 506.

13. Rosenberg M., Gutiik D., Rosenberg E. // FEMS. Microbiol. Lett. - 1980. - № 9. - Р. 29.

14. Левинский Б.В. Все о гуматах. - 4-е изд., перераб. и доп. - Иркутск: Корф-Полиграф, 2000. - 75 с.

15. Миронов О.Г., Лебедь А.А., Семанов Г.Н., Мурашев И.А. Результаты изучения токсичности и биоразлагаемости некоторых диспергентов в морской воде // Экспериментальная водная токсикология. - Рига: Зинатне, 1985. - Вып. 10. - С. 122 - 129.

16. Долгополова А.В., Кушнарев Д.Ф., Ким Ен Хва и др. Количественный фрагментарный состав растворенных в воде нефтепродуктов // Химия и технология воды. - 1991. - Т.13, № 10. - С. 909-911.

17. Piegorsch W.W., Bailer A. J. Statistics for Environmental Biology and Toxicology (Interdisciplinary Statistics). – Chapman & Hall, 1997. – 579 p.

18. Dagurov A.V., Stom D. I. Effect of Humate on Oil and Petroleum Investigated at the Example of Germinating Capacity of Seeds and Cladocera // The 2nd International Scientific Practical Conference “Earthworms and Soil’s Fertility”, March 17-20, 2004. – Vladimir, 2004. – P. 255-256.

19. Лозовой Д.В. Биологический способ обнаружения загрязнения в водных средах: автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Иркутск, 2003. - 24 с.

20. Дагуров А.В., Стом Д.И., Вятчина О.Ф., Мишарин А. Использование спор бактерий для выяснения механизмов антитоксического эффекта гуминовых веществ // Материалы Межрегиональной научно-практ. конф., посвященной 90-летию со дня рождения профессора А.Г. Гриневич «Биология микроорганизмов и их научно-практическое использование», г. Иркутск, 27-28 октября, 2004. – Иркутск, 2004. - С.21-24.

21. Абрамзон А.А., Зайченко Л.П., Файнгольд С.И. Поверхностно-активные вещества. Синтез, анализ, свойства, применение: учеб. пособие для вузов. – Л.: Химия, 1988. – 200 с.

Официальный сайт предприятия ООО «АгроТех Гумат». Тел.: (3952)53-93-59

Резюме

Объекты и методы исследований

Таблица 3 - Влияние смесей равных объемов насыщенных растворов нефти, нефтепродуктов и 0,5 г/л “Гумат-Экстра” на выживаемость дафний (% от общего числа рачков)

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ